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中文名稱：MTS細胞增殖與細胞毒性檢測試劑盒

英文(wen)名稱(cheng)：MTS Cell Proliferation And Cytotoxicity Detection Kit

產品規格：500次
產品貨號：LZ-01X6321

發貨周期：1～3天

商品介紹：

實驗報告：

一、分離與培養：

    1、無菌條件下(xia)，取出(chu)1-3d 齡SD大鼠心房(fang)組(zu)織，然后(hou)用(yong)PBS將此組(zu)織塊清洗2次(ci)，最(zui)后(hou)將組(zu)織剪成(cheng)1mm3左右大小；

    2、往組織塊中加入(ru)4 mL酶(mei)(mei)消化液（0.1% 和0.1% I型膠(jiao)原(yuan)酶(mei)(mei)），混(hun)懸(xuan)(xuan)10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單(dan)細胞懸(xuan)(xuan)液，自(zi)然沉淀并收(shou)集上清(qing)，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

    3、剩(sheng)下的(de)組織(zhi)(zhi)再加入3～4mL酶消化(hua)(hua)液，混懸10s，置37℃消化(hua)(hua)10 min后(hou)，按上述方法(fa)收集上清(qing)并終止(zhi)消化(hua)(hua)后(hou)4℃放置，重(zhong)復此步驟2-3次(ci)，直至(zhi)組織(zhi)(zhi)*被消化(hua)(hua)；

    4、用(yong)200目不銹鋼篩網過(guo)濾細(xi)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xi)胞用(yong)含有(you)10％ FBS DMEM/F12培(pei)養基混(hun)懸，接種于25cm2培(pei)養瓶(ping)，放置于37℃ ，5％CO2 培(pei)養箱中培(pei)養；

    5、差速貼壁1h后，吸出培養(yang)基，按(an)實驗需要接種于6孔(kong)板中繼(ji)續(xu)培養(yang)；

二、免疫熒光鑒定：

    1、待心(xin)房(fang)肌細胞生長至80%融合時，棄去培(pei)養基，用(yong)溫育的PBS沖洗細胞2次(ci)，每(mei)次(ci)10min，然后(hou)用(yong)4%多聚甲醛(quan)在室溫條(tiao)件下固定細胞15min；

    2、PBS沖洗細胞(bao)2次(ci)，每次(ci)10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

    3、PBS沖(chong)洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用(yong)4% BSA封(feng)閉細胞30min；

    4、按1: 100的比例稀(xi)釋α-actin一抗，然(ran)后將其放在(zai)4℃冰(bing)箱中(zhong)孵育(yu)細胞過夜；

    5、PBS沖洗(xi)細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件(jian)下放(fang)置1h；

    6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

培養操作步驟：

1．用(yong)蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用(yong)無菌絲綢布(bu)擦(ca)拭干凈，不要用(yong)紗布(bu)； 

2．將蓋玻片輕輕放(fang)入6孔培(pei)養板（每孔一片）或培(pei)養皿(min)中（每個平(ping)皿(min)可(ke)放(fang)置2-3片）； 

3．在距離紫(zi)外(wai)燈直射范圍內(nei)20-30 厘米處照(zhao)射2-3小時； 

4．將(jiang)經過計(ji)數(shu)的細胞懸浮液(ye)移入培養(yang)板中，使(shi)蓋玻(bo)片(pian)*浸在培養(yang)液(ye)中； 

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。 

人Ⅲ型(xing)膠(jiao)原(Col Ⅲ)ELISA試(shi)劑(ji)盒    人ELISA試(shi)劑(ji)盒    96T/48T    

人(ren)Ⅲ型前膠(jiao)原肽(PⅢNP)ELISA試劑盒    人(ren)ELISA試劑盒    96T/48T    

人(ren)Ⅳ型(xing)膠(jiao)原(Col Ⅳ)ELISA試劑盒    人(ren)ELISA試劑盒    96T/48T    

人BH3結(jie)構域凋亡(wang)誘導蛋白(Bid)ELISA試劑(ji)盒    人ELISA試劑(ji)盒    96T/48T    

人B細(xi)胞κ 輕肽(tai)基(ji)因(yin)增強(qiang)子(zi)核因(yin)子(zi)抑制(zhi)因(yin)子(zi)ε(Nfkbie)ELISA試(shi)劑(ji)(ji)盒(he)      人ELISA試(shi)劑(ji)(ji)盒(he)    96T/48T    

人B細胞分化(hua)因子(BCDF)ELISA試劑(ji)盒      人ELISA試劑(ji)盒    96T/48T    

人(ren)(ren)B細胞活(huo)化因子受體(BAFF-R)ELISA試劑盒(he)      人(ren)(ren)ELISA試劑盒(he)    96T/48T    

人(ren)B細胞連接蛋(dan)白(BLNK)ELISA試劑盒(he)(he)    人(ren)ELISA試劑盒(he)(he)    96T/48T    

人B細胞淋巴(ba)瘤因(yin)子2(Bcl-2)ELISA試(shi)劑盒    人ELISA試(shi)劑盒    96T/48T    

人(ren)B細胞淋(lin)巴(ba)瘤(liu)因(yin)子3(Bcl3)ELISA試劑盒    人(ren)ELISA試劑盒    96T/48T    

人(ren)B細胞生長因子(BCGF)ELISA試(shi)劑盒      人(ren)ELISA試(shi)劑盒    96T/48T    

人B細胞(bao)受(shou)體(BCR)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

人B因子(BF)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

人C4結合蛋白(C4BP)ELISA試(shi)劑盒    人ELISA試(shi)劑盒    96T/48T    

人cAMP反應元件結合(he)蛋白(bai)(CREB)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T  ;  

人(ren)CCAAT增強子結合蛋白α(C/EBPα)ELISA試(shi)劑盒(he)    人(ren)ELISA試(shi)劑盒(he)    96T/48T  ;  

人(ren)CCAAT增強子(zi)結合蛋白δ(C/EBPδ)ELISA試劑(ji)盒(he)    人(ren)ELISA試劑(ji)盒(he)    96T/48T    

人CCAAT增強子結(jie)合蛋白ε(C/EBPε)ELISA試劑盒(he)    人ELISA試劑盒(he)    96T/48T    

人CC趨化因子受體1(CCR1)ELISA試(shi)(shi)劑(ji)盒(he)  ;  人ELISA試(shi)(shi)劑(ji)盒(he)    96T/48T    

一(yi)步法(fa)TUNEL細胞凋亡(wang)檢測(ce)試劑盒(紅(hong)色熒光)    

TUNEL細(xi)胞凋亡檢測(ce)試劑盒(顯色法)    

Caspase 1 活性檢測試劑(ji)盒    

Caspase 2 活性檢(jian)測試劑盒(he)    

Caspase 3 活性檢測試劑盒    

Caspase 4 活性(xing)檢測試劑盒    

Caspase 6 活性(xing)檢測(ce)試劑盒    

Caspase 8 活(huo)性檢(jian)測試劑盒    

Caspase 9 活性檢測試劑盒(he)    

Caspase抑制劑(Z-VAD-FMK)    

Caspase 3抑制劑(Ac-DEVD-CHO)    

線(xian)粒體膜電位(wei)檢測試劑盒    

羅丹明123    

CFDA SE細(xi)胞增殖與示蹤(zong)檢(jian)測試劑盒(he)    

細胞增殖(zhi)示(shi)蹤熒光探針(CFDA SE)    

Ad-GFP-LC3B    

Ad-mCherry-GFP-LC3B    

DAPI溶液(5mg/ml)    

DAPI染色液    

Hoechst 33258細(xi)胞(bao)藍色(se)熒光染料(liao)    

MTS細胞增殖與細胞毒性檢測試劑盒Hoechst 33258染(ran)色(se)液    

Hoechst 33342細(xi)胞藍色熒光染料    

Hoechst 33342染色液(ye)    

活細(xi)胞染色液(Hoechst 33342)(100×)    

注意事項：

1、本試(shi)劑盒僅供科學(xue)研(yan)究使用(yong)，不可用(yong)于診斷或治療。

2、螺旋(xuan)蓋(gai)微(wei)量(liang)試(shi)劑(ji)管裝(zhuang)的試(shi)劑(ji)在開蓋(gai)前請短(duan)暫離心(xin)，將蓋(gai)和管內壁上(shang)的液體離心(xin)至(zhi)管底，避免開蓋(gai)時試(shi)劑(ji)損失。

3、禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使(shi)用效果。

4、樣(yang)品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

5、最(zui)好使(shi)用(yong)一次(ci)性(xing)吸(xi)頭、管、瓶或玻璃(li)器(qi)皿(min)，可重(zhong)復使(shi)用(yong)的玻璃(li)器(qi)皿(min)必須在使(shi)用(yong)前(qian)清洗并*清除殘留清潔(jie)劑。

6、避(bi)免皮膚(fu)或粘膜與試劑接觸。

7、需長時間保(bao)存(cun)可-20℃避(bi)光保(bao)存(cun)。避(bi)免反復(fu)凍融(rong)，否則(ze)將會增加空(kong)白吸收(shou)，從而影響檢(jian)測(ce)結果。最好小劑量分裝，用避(bi)光袋或(huo)是(shi)黑紙(zhi)、錫箔紙(zhi)包住(zhu)避(bi)光。

8、用(yong)培養(yang)基(ji)或 PBS 來配制(zhi)待檢(jian)測(ce)藥物(wu)。如(ru)果待測(ce)藥物(wu)有還(huan)原性，則(ze)(ze)測(ce)定不含(han)細(xi)胞，僅(jin)含(han)有 MTS 的(de)待測(ce)藥物(wu)溶(rong)液在(zai) 490 nm處的(de)空(kong)白(bai)吸光(guang)(guang)度。如(ru)果該(gai)吸光(guang)(guang)度很小(xiao)，則(ze)(ze)可以直接加入 MTS ，如(ru)果吸光(guang)(guang)度相對較大，則(ze)(ze)需要除去培養(yang)基(ji)，并用(yong)新(xin)鮮培養(yang)基(ji)洗滌細(xi)胞兩次，然后加入新(xin)的(de) 100 μl 培養(yang)基(ji)和 10 μl MTS 進行檢(jian)測(ce)。

9、細(xi)胞處理(li)需要(yao)小心操作(zuo),盡(jin)量(liang)避免人為的損傷細(xi)胞。

10、加 MTS 溶液后孵育時間(jian)的長短根據(ju)細胞的類型和(he)細胞的密度等實驗(yan)情況(kuang)而定(ding)，對于大多數情況(kuang)孵育 1 小時即(ji)可，白細胞需要培養較長時間(jian)。

11、如果不是使用 96 孔板檢測，MTS 溶液的(de)用量相應等比(bi)例增加即可。