產品屬(shu)性：

需(xu)要而未提(ti)供的(de)試劑和(he)器(qi)材：

1. 產品僅用于科(ke)研標準規格酶標儀(yi)

2. 高速離心機

3. 電熱(re)恒溫培養箱

4. 干凈的(de)試管和Eppendof管

5. 系(xi)列可調節移(yi)液(ye)(ye)器及吸頭，一次(ci)檢測樣品較多時，用多通(tong)道移(yi)液(ye)(ye)器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

標本要(yao)求：

1．標本采集(ji)后盡(jin)早(zao)進(jin)行提取，提取按相關文獻進(jin)行，提取后應盡(jin)快進(jin)行實驗(yan)。若不能馬(ma)上進(jin)行試(shi)驗(yan)，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍(dong)融。

2．不能檢測含NaN3的(de)樣品，因NaN3抑制(zhi)辣根過氧化(hua)物酶的(de)（HRP）活性。

備試劑(ji)與收集血樣：

1.  收集標本(ben)：血(xue)(xue)清、血(xue)(xue)漿(jiang)（EDTA 、檸檬酸(suan)鹽、肝素抗(kang)凝）、細胞培養上清液、組織勻漿(jiang)等盡早檢測， 2-8 ℃ 保(bao)存(cun)48 小(xiao)時(shi)；更長時(shi)間須冷凍(dong)（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保(bao)存(cun)，避免反復(fu)凍(dong)融(rong)。

2.  標(biao)準(zhun)品液配制：使用前(qian)加入(ru)0.5ml 蒸餾水 混(hun)勻，配成(cheng) 120 0ng/ml 的溶(rong)(rong)液 。 設標(biao)準(zhun) 管 8 管，管加標(biao)本(ben)(ben)稀(xi)釋液 900ul ，第(di)(di)(di)二(er)至第(di)(di)(di)八管加入(ru)標(biao)本(ben)(ben)稀(xi)釋液 500ul 。在管中(zhong)加入(ru) 120 0ng/ml 的標(biao)準(zhun)品溶(rong)(rong)液 100ul 混(hun)勻后(hou)用加樣(yang)器(qi)吸(xi)出(chu) 500ul ，移至第(di)(di)(di)二(er)管 。如此反復作對(dui)倍稀(xi)釋，從第(di)(di)(di)七 管 中(zhong)吸(xi)出(chu) 500ul 棄去。第(di)(di)(di)八 管 為空白(bai)對(dui)照(zhao)。

3.  10× 標(biao)本稀釋液(ye)用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋（ 示例(li)： 1ml濃稀釋液(ye) +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水(shui) 1:20 稀釋（示例(li)：1ml 濃縮(suo)洗滌液加入 19ml 的(de)重蒸水(shui)）

檢測程序：

1.  加(jia)樣(yang)：每孔各加(jia)入標(biao)準品或待(dai)測樣(yang)品 100ul ，將反應板充分(fen)混勻(yun)后(hou)置 37 ℃ 120 分(fen)鐘。

2.  洗(xi)(xi)板(ban)：用(yong)洗(xi)(xi)滌液(ye)將(jiang)反應板(ban)充分洗(xi)(xi)滌 4-6 次，向(xiang)濾紙上印干。

3.  每孔中(zhong)加入抗體(ti)工作液10 0ul 。將反應(ying)板充(chong)分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加(jia)酶標抗體工作液(ye)100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

樣本實驗前準備：

ELISA進口(kou)試(shi)劑盒液(ye)體樣本：包(bao)括(kuo)血清、血漿(jiang)、尿液(ye)、胸(xiong)腹水、腦脊(ji)液(ye)、細胞培養上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離(li)心20分鐘左右(you)（2000-3000轉/分）。仔(zi)細收(shou)集上清(qing)。保存過(guo)程中如有沉(chen)淀形成，應(ying)再次離(li)心。

（2）血漿：

應(ying)根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉(na)或肝(gan)素作為(wei)抗凝(ning)劑，混合10-20分(fen)鐘(zhong)后，離(li)心(xin)20分(fen)鐘(zhong)左右（2000-3000轉/分(fen)）。仔細(xi)收集上清。保存過(guo)程中如有(you)沉淀形成，應(ying)再次離(li)心(xin)。

（3）尿液：

用無(wu)菌(jun)管(guan)收集。離心20分(fen)鐘左右(you)（2000-3000轉(zhuan)/分(fen)）。仔細收集上清。保存(cun)過程中如有沉淀形成(cheng)，應(ying)再(zai)次離心。胸腹(fu)水、腦脊液參(can)照(zhao)此(ci)實(shi)行。

（4）細胞(bao)培養上清：

檢測分(fen)泌性的成份時，用無(wu)菌管收集。離心20分(fen)鐘左(zuo)右（2000-3000轉/分(fen)）。仔(zi)細收集上清。

（5）培養細胞

檢測細(xi)胞(bao)內的成份(fen)(fen)時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xi)胞(bao)懸液(ye)，細(xi)胞(bao)濃(nong)度(du)達到100萬/ml左右。通(tong)過反復凍融或加入組織(zhi)蛋白萃取試劑，以使(shi)細(xi)胞(bao)破壞并放出細(xi)胞(bao)內成份(fen)(fen)。離心20分(fen)鐘(zhong)左右（2000-3000轉/分(fen)）。仔細(xi)收集上清。保(bao)存(cun)過程中如有沉淀(dian)形成，應(ying)再次離心。

（6）組織標本

切割(ge)標本(ben)后(hou)，稱(cheng)取(qu)重(zhong)量(liang)。加(jia)(jia)入一定量(liang)的PBS，PH7.4。用(yong)(yong)液氮迅速冷凍(dong)保存備用(yong)(yong)。標本(ben)融化(hua)(hua)后(hou)仍然保持2-8℃的溫度(du)。加(jia)(jia)入一定量(liang)的PBS（PH7.4），或組織(zhi)蛋白萃(cui)取(qu)試劑, 用(yong)(yong)手工或勻漿器將標本(ben)勻漿化(hua)(hua)。離心(xin)20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細(xi)收集上清。分裝(zhuang)后(hou)一份待檢測，其余冷凍(dong)備用(yong)(yong)。

Phospho-ATP1A1 (Ser16)    磷酸化鈉(na)鉀ATP酶(mei)蛋白(bai)a1抗體

Acetyl CoA Carboxylase    乙酰羧化酶抗體

Phospho-Acetyl Coenzyme A carboxylase alpha (Ser78)    磷(lin)酸化(hua)乙酰羧化(hua)酶抗體

Phospho-Ack1 (Tyr859 + 860)    磷酸化Ack1抗體

phospho-AMPK alpha-1(Ser485+Ser491)    磷(lin)酸化腺苷單磷(lin)酸活化蛋白激酶α1抗(kang)體(ti)

phospho-AMPK beta 1 (Ser108)    磷酸(suan)化腺苷單磷酸(suan)活化蛋白激酶β1抗(kang)體(ti)

phospho-ALK (Tyr1604)    磷酸化間變型淋巴瘤激酶抗體(ti)

phospho-ATM(Ser1981)    磷酸化毛細血管擴張性共(gong)濟失調癥(zheng)突變(bian)蛋白抗體(ti)

phospho-ATP citrate lyase (Ser455)    磷酸化(hua)三磷酸腺(xian)檸檬酸裂解酶抗體

phospho-ATR (Ser428)    磷(lin)酸化ATR抗體

AMN1    細胞核重定(ding)位及紡錘(chui)體檢查點蛋白AMN1抗體

ALG11    天連接糖基化11抗體

ASF1A    細胞衰老相關蛋白ASF1A抗體

AGPHD1    氨(an)基(ji)糖苷類磷酸結構域蛋(dan)白(bai)抗體

ASGPR1    唾液酸糖(tang)蛋白受體1抗體

ARSF    芳(fang)香基硫酸(suan)酯酶F抗體    NE-B重酒石(shi)酸(suan)ISA試劑盒    NE-B ELISA Kit    48T/96T

TAF腫瘤血管生長因子ELISA試劑盒    TAF ELISA Kit    48T/96T

TAA腫瘤相關抗原ELISA試劑盒    TAA ELISA Kit    48T/96T

TSTA腫瘤特(te)異(yi)性移植抗原(yuan)ELISA試劑盒    TSTA ELISA Kit    ;48T/96T

TSGF腫瘤特異(yi)性生長(chang)因子(zi)ELISA試劑盒    TSGF ELISA Kit    48T/96T

TSA腫瘤(liu)特異性抗原ELISA試劑盒    TSA ELISA Kit    48T/96T

TGSF腫瘤特異生長因子/腫瘤相關(guan)因子ELISA試劑盒    TGSF ELISA Kit    48T/96T

TNFAIP6腫瘤壞(huai)死因子誘導基因6蛋白ELISA試劑盒    TNFAIP6 ELISA Kit    48T/96T

TWEAK腫瘤壞(huai)死因子(zi)相關弱凋(diao)亡誘導因子(zi)ELISA試劑盒    TWEAK ELISA Kit    48T/96T

TRANCE腫瘤(liu)壞死因子相關激(ji)活(huo)誘導因子ELISA試劑盒    TRANCE ELISA Kit    48T/96T

TRAIL-R3腫(zhong)瘤壞死因(yin)子相關凋(diao)亡誘導配(pei)體(ti)受體(ti)3ELISA試(shi)劑盒    TRAIL-R3 ELISA Kit    48T/96T

TRAIL-R2/DR5腫(zhong)瘤壞死因子相(xiang)關凋亡誘(you)導(dao)配(pei)體(ti)(ti)受體(ti)(ti)2ELISA試劑盒  ;  TRAIL-R2 ELISA Kit    48T/96T

TRAIL-R4腫瘤壞死因(yin)子(zi)相關凋亡誘導(dao)配體4ELISA試(shi)劑盒    TRAIL-R4 ELISA Kit    48T/96T

TRAIL-R3腫瘤(liu)壞死(si)因(yin)子相關(guan)凋亡誘導配體3ELISA試劑盒    TRAIL-R3 ELISA Kit    48T/96T

TRAIL-R1腫瘤壞死因子相關凋(diao)亡(wang)誘導配體1ELISA試劑盒    TRAIL-R1 ELISA Kit    48T/96T

TRAF6腫瘤壞(huai)死因子受體相(xiang)關因子6ELISA試劑(ji)盒(he)    TRAF6 ELISA kit    48T/96T

TRAF1腫瘤壞(huai)死因(yin)子受(shou)體相關因(yin)子1ELISA試劑盒    TRAF1 ELISA kit    48T/96T

TNFRSF18腫瘤壞死因子受體超(chao)家族成(cheng)員18ELISA試劑盒    TNFRSF18 ELISA KIT    48T/96T

TNFsR-Ⅱ腫瘤(liu)壞死因子可(ke)溶性受體(ti)ⅡELISA試劑(ji)盒    TNFsR-Ⅱ ELISA Kit     48T/96T

TNFsR-Ⅰ腫(zhong)瘤壞死因子可溶(rong)性受體(ti)ⅠELISA試劑(ji)盒    TNFsR-ⅠELISA Kit     48T/96T

TL1A/TNFSF15腫瘤壞死因(yin)子(zi)超家族15ELISA試(shi)劑盒(he)    TL1A/TNFSF15 ELISA Kit    48T/96T

TBA總膽汁酸ELISA試劑盒腫瘤壞死(si)因子γELISA試劑盒    TNFγ ELISA Kit    48T/96T

TNFβ腫瘤壞死因子βELISA試劑盒    TNFβ ELISA Kit    48T/96T

TACE腫瘤壞死因子α轉化(hua)酶ELISA試(shi)劑盒    TACE ELISA Kit    48T/96T

操(cao)作步驟：

1.標準(zhun)品(pin)的稀釋：本試劑盒提(ti)供原倍標準(zhun)品(pin)一支，用戶(hu)可按照下列圖表在小試管(guan)中進(jin)行稀釋。

2.加(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)：分別設空(kong)白孔(kong)（空(kong)白對照(zhao)孔(kong)不(bu)(bu)加(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品及酶(mei)(mei)標(biao)試劑(ji)，其余各步(bu)操(cao)作相同）、標(biao)準(zhun)孔(kong)、待測樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品孔(kong)。在酶(mei)(mei)標(biao)包被板(ban)上(shang)標(biao)準(zhun)品準(zhun)確加(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)50μl，待測樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品孔(kong)中先加(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品稀釋液40μl，然后(hou)再加(jia)(jia)(jia)待測樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品10μl（樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品最終稀釋度為5倍）。加(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)將樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品加(jia)(jia)(jia)于酶(mei)(mei)標(biao)板(ban)孔(kong)底部，盡量不(bu)(bu)觸及孔(kong)壁(bi)，輕(qing)輕(qing)晃(huang)動混勻。

3.溫育：用封板(ban)膜(mo)封板(ban)后置37℃溫育30分鐘。

4.配液(ye)：將(jiang)30倍濃縮洗滌液(ye)用蒸餾水(shui)30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封(feng)板膜，棄去(qu)(qu)液體(ti)，甩干，每孔(kong)加滿洗滌液，靜置30秒后(hou)棄去(qu)(qu)，如此重復(fu)5次，拍(pai)干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作(zuo)同5。

9.顯色(se)：每孔先加入顯色(se)劑(ji)(ji)A50μl，再加入顯色(se)劑(ji)(ji)B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色(se)15分鐘。

10. 終(zhong)止：每孔加終(zhong)止液50μl，終(zhong)止反應（此(ci)時藍色立轉黃(huang)色）。

11. 測(ce)(ce)定(ding)：以空(kong)白空(kong)調零(ling)，450nm波長(chang)依序測(ce)(ce)量各孔的吸光度(du)（OD值(zhi)）。 測(ce)(ce)定(ding)應在加終止液后15分鐘以內進行。