公司產品僅供科研使用，下列是產品屬性：

商品介紹：
MTT廣泛用于檢測細胞生長，其原理是MTT可以被活細胞線粒體內的脫氫酶還原生成深紫色的formazan結晶，而死細胞則無此活性。深紫色的formazan結晶被溶解后可以通過測定490nm波長的光吸收而測定出其濃度，并由此推測出細胞的活力，細胞增殖越旺盛，則吸光度越高；細胞毒性越大，則吸光度越低。
產品特點：
1．采用*的Formazan溶解液，可以充分溶解formazan，減少誤差。
2．背景低，靈敏度高，線性范圍寬，重復性好。
3．本產品為足夠500次(5個96孔細胞培養板)微孔板檢測。
4．可(ke)用于生物活(huo)性(xing)因子(zi)活(huo)性(xing)檢測(ce)、抗腫瘤(liu)藥物篩選(xuan)、細胞毒性(xing)試驗、腫瘤(liu)放射敏感性(xing)測(ce)定等。

存條件：低溫運輸、-20℃保存(但溶液B也可以常溫運輸和保存)，有效期一年。
使用方法：
下面操作是檢測細胞毒性的試驗，其他應用跟此類似或更簡單(如生長曲線試驗)，操作步驟可以以此為基礎稍作修改即可，故不再贅述。
㈠、接種細胞
1．按常規消化法消化匯合的單層細胞，收集到含血清的培養基中。
2．200g離心5分鐘收集細胞沉淀。
3．用培養基重懸細胞沉淀，制備成單細胞懸浮液并計數。
4．將細胞稀釋到2.5×103個/mL～5×10個/mL之間(需要根據細胞的生長速度決定)，如果不知道生長數度，一般可以稀釋到1×10個/mL。
5．將足夠量的細胞懸液轉移到培養皿中(便于用排槍取樣)。一個96孔板的MTT檢測需要約20mL的細胞懸液。
6．用排槍在96孔板除的第2-11列各孔正中央加入200μL細胞懸液(對正常細胞)。如果是腫瘤細胞，則加入100μL腫瘤細胞懸液和100μL培養基(總體積為200μL)。注意：一定要把細胞加在孔的正中，否則細胞會聚集在孔的角落處，影響試驗。
7．用排槍在96孔板除的第1和第12各孔中加入跟細胞懸液等體積的培養基。第1 列各孔將作為+培養基-細胞+MTT對照(用于測OD時調零)，第12列加培養基的作用是減少邊緣效應對第11 列反應的影響。
8．按常規細胞培養方法在37℃和5% CO2條件下孵育1-3天，使細胞進入指數生長期。
㈡、藥物處理
9．用培養基將藥物稀釋到8個待測濃度(如果不知道待測濃度，則需要預試驗確定)，一般一種藥物需要做3塊平行板。
10．去除第2到第11列(共10列)各孔中的培養基(不要觸動細胞)，保留第1 列和第12列各孔中的培養基。
11．在第2和第11列(共2列)的各孔中加入200μL新鮮培養基，這些孔將作為+培養基+細胞-藥物的對照。
12．在第3到第10列(共8列)各孔中加入8個濃度梯度的待測藥物，每列加入一個濃度的藥物。
13．按常規方法把96孔板繼續放在在37℃和5% CO2條件下孵育一定的時間，此段時間即為藥物處理細胞的時間，由用戶自己決定。
14．處理結束后去除第2 到第11列(共10列，均含細胞)所有孔中的培養基，并再加入100μL新鮮培養基。
15．每天換培養使細胞數量擴增2-3倍(所需時間隨細胞不同而不同)。
㈢、存活細胞計數
16．在生長末期，去除第1到第11列各孔中的培養基后，再加入100μL新鮮培養基和10μL溶液A(含MTT成分)，用錫箔包裹住96孔板后放在37℃和5% CO2條件下繼續培養4-8小時。注意：溶液A在低溫情況下會凝固，使用前請室溫放置或20-25℃水浴至全部溶解，搖勻后使用。MTT有致癌性，一定要帶手套操作。
17．小心吸棄孔內培養基(含溶液A)。由于培養基可能會影響光吸收，最好盡可能去除。
18．每孔加入100μL溶液B，置搖床上低速振蕩10分鐘，使MTT形成的formazan結晶物充分溶解。
19．由于產物不穩定，故需要立即在酶聯免疫檢測儀上選擇490nm測定吸光度。
?注意：用第1 列各孔(+培養基-細胞+MTT對照)調零。
20．計數同樣處理的各次重復的平均值。
21．以藥物濃度為橫軸，以吸光度為縱軸繪制曲線。由于各處理吸光度絕對值差別很大，一般需將其轉化成生長抑制率(以不加藥物的第2和第11列各孔數據的平均數作為100%)，這樣便于計算出IC50，用于各種藥物處理效果的比較。注意：如果測生長曲線，則以時間為橫軸。正常生長曲線一般呈現S型，具有促進作用的則斜率加大。

注意事項：
①加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
⑨不(bu)用(yong)的其它試劑應包(bao)裝好或(huo)蓋(gai)好。不(bu)同(tong)批(pi)號(hao)的試劑不(bu)要混用(yong)。保質前(qian)使用(yong)。

實(shi)驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)

人CD14分子(CDl4)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

人(ren)CD30分子(zi)(CD30)ELISA試(shi)(shi)劑(ji)盒    人(ren)ELISA試(shi)(shi)劑(ji)盒    96T/48T    

人chemerin ELISA試劑盒(he)    人ELISA試劑盒(he)    96T/48T    

人(ren)CX3C趨化因子受體1(CX3CR1)ELISA試劑(ji)盒    人(ren)ELISA試劑(ji)盒    96T/48T    

人CXC趨化因子配體(ti)16(CXCL16)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)    人ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)    96T/48T    

人(ren)(ren)CXC趨(qu)化因子受體1(CXCR1)ELISA試(shi)劑(ji)盒    人(ren)(ren)ELISA試(shi)劑(ji)盒    96T/48T    

人CXC趨化因子受體3(CXCR3)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

人(ren)C多肽(tai)(CP) ELISA試劑盒(he)    人(ren)ELISA試劑盒(he)    96T/48T    

人(ren)C反(fan)應蛋白(CRP)ELISA試劑盒    人(ren)ELISA試劑盒    96T/48T    

XY-E11196    人ELISA試劑(ji)盒    ;96T/48T    

人C肽(tai)(C-Peptide)ELISA試劑盒(he)    人ELISA試劑盒(he)    96T/48T    

人C型(xing)鈉尿肽(tai)(CNP)ELISA試(shi)劑(ji)盒    人ELISA試(shi)劑(ji)盒    96T/48T    

人C型凝集素結構域家族4成員E(CLEC4E)ELISA試(shi)劑盒    人ELISA試(shi)劑盒    96T/48T    

人D-乳酸(suan)脫氫酶(mei)(D-LDH) ELISA試劑盒(he)      人ELISA試劑盒(he)    96T/48T    

人(ren)Dickkopf 1(DKK1)ELISA試(shi)劑盒    人(ren)ELISA試(shi)劑盒    96T/48T    

人D二聚(ju)體(D2D)ELISA試劑(ji)盒(he)    人ELISA試劑(ji)盒(he)    96T/48T    

人EB病毒(du)IgA(EBv IgA)ELISA試(shi)劑盒(he)    人ELISA試(shi)劑盒(he)    96T/48T    

人EB病毒IgG(EBv IgG)ELISA試劑(ji)盒    人ELISA試劑(ji)盒    ;96T/48T    

人EB病(bing)毒IgM(EBv IgM)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    ;96T/48T  ;  

人(ren)EJ抗體/抗甘氨酰tRNA合成酶抗體(EJ/GlyRS)ELISA試劑(ji)盒(he)      人(ren)ELISA試劑(ji)盒(he)    96T/48T    

人E鈣(gai)粘著蛋白(bai)/上(shang)皮性鈣(gai)黏(nian)附(fu)蛋白(bai)(E-Cad)ELISA試劑(ji)盒(he)    人ELISA試劑(ji)盒(he)    96T/48T    

人E選(xuan)擇素(su)(E-Selectin/CD62E)ELISA試(shi)劑(ji)盒      人ELISA試(shi)劑(ji)盒    96T/48T    

人α-內肽(α-EP)ELISA試(shi)劑盒(he)    人ELISA試(shi)劑盒(he)    96T/48T    

人(ren)α/β干擾素受體(IFN-α/βR)ELISA試(shi)劑盒(he)(he)      人(ren)ELISA試(shi)劑盒(he)(he)  ;  96T/48T    Caspase 9 活性(xing)檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒(he)(he)    

Caspase抑制(zhi)劑(Z-VAD-FMK)    

Caspase 3抑制劑(Ac-DEVD-CHO)    

線粒(li)體膜電(dian)位檢測試劑盒    

羅丹明(ming)123    

CFDA SE細胞增殖與示蹤檢(jian)測試劑盒    

細胞增殖(zhi)示蹤熒光探針(CFDA SE)    

Ad-GFP-LC3B    

Ad-mCherry-GFP-LC3B    

DAPI溶液(5mg/ml)    

DAPI染色液(ye)    

Hoechst 33258細胞藍色熒(ying)光染料    

Hoechst 33258染(ran)色液    

Hoechst 33342細胞藍色熒光染料(liao)    

Hoechst 33342染色液    

活細胞染色液(Hoechst 33342)(100×)    

細胞活(huo)力檢測試(shi)劑盒(化學發光法)    

碘化丙(bing)啶    

Annexin V-FITC/PI細胞凋亡檢測試劑盒    

細胞周(zhou)期與凋亡檢測試(shi)劑盒(he)    

Alexa Fluor 488/PI細胞(bao)凋亡檢測試劑盒(he)    

Annexin V-PE/7-AAD凋亡流式檢(jian)測試劑盒    

Annexin V-EGFP/PI雙染細胞凋(diao)亡檢測試劑盒(he)    

Annexin V-FITC/PI雙染細胞凋亡檢(jian)測試劑盒    

Annexin V-PE細胞凋亡檢測(ce)試劑(ji)盒    

MTT檢測試劑盒Annexin V-PE/7-AAD雙染細胞凋亡檢測試(shi)劑盒    

Annexin V-APC細胞凋亡檢(jian)測試劑(ji)盒    

Annexin V-APC/7-AAD雙染細(xi)胞凋亡檢測試(shi)劑(ji)盒    

操作程(cheng)序：

注意：最重要的(de)(de)是及時固定(ding)(ding)，并在(zai)固定(ding)(ding)液中(zhong)加入0.1%的(de)(de)DEPC處理，以抑制(zhi)RNA酶(mei)對mRNA的(de)(de)分解作用(yong)。此(ci)外(wai)，過度固定(ding)(ding)對原位雜交有明顯的(de)(de)不利影響。

1．玻片(pian)的處(chu)理：一般(ban)采用多聚賴氨酸或APES。切片(pian)厚度(du)10-20μm。

2．細胞在多聚賴氨(an)酸處理的(de)蓋玻片上進(jin)行培(pei)養(yang)，條件為37℃和5%的(de)CO2，所用培(pei)養(yang)基為Dulbecco基礎培(pei)養(yang)基。細胞長好后0.1M PBS(PH7.4)洗(xi)2分鐘×3次。

3．培養(yang)細胞和冰(bing)凍切片(pian)均可(ke)(ke)用下述方法固(gu)定：固(gu)定液(ye)為4%多(duo)聚甲醛(quan)/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室溫固(gu)定 20--30分鐘(zhong)。蒸餾水(shui)充分洗(xi)滌，干燥后-20℃冰(bing)凍可(ke)(ke)保(bao)存(cun)2周以上。

4．30%H2O2 1份+純甲醇(chun)50份混合，室溫處理(li)30分鐘。蒸餾水(shui)洗滌3次(ci)。

5．暴露mRNA核(he)酸(suan)片(pian)(pian)段：切片(pian)(pian)上滴加3%檸檬(meng)酸(suan)新鮮稀釋(shi)1ml 3% 檸檬(meng)酸(suan)加2滴濃縮型，混勻(yun))，37℃或室(shi)溫(wen)消化5—120秒鐘。有時(shi)也可(ke)以不消化。原位雜交用(yong) PBS洗3次(ci)(ci)×5分(fen)鐘。蒸(zheng)餾水洗1次(ci)(ci)。

6.后固(gu)定：消化(hua)后才(cai)需(xu)要。固(gu)定液為1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有(you)1/1000 DEPC。室(shi)溫固(gu)定 10分鐘。蒸餾水洗滌3次(ci)。

7．預雜交：濕(shi)盒的準備——干的雜交盒底(di)部加20%甘油20ml以保持(chi)濕(shi)度(du)。按(an)每張切片20μι加預雜交液。恒溫箱38-42℃2—4小時(shi)。吸(xi)取多余液體，不洗。

8．雜(za)交(jiao)——按(an)每張切片(pian)(pian)20μι雜(za)交(jiao)液，加在(zai)切片(pian)(pian)上(shang)。將(jiang)原(yuan)位雜(za)交(jiao)專用蓋(gai)(gai)玻片(pian)(pian)的保護膜揭開后，蓋(gai)(gai)在(zai)切片(pian)(pian)上(shang)。恒溫箱38-42℃雜(za)交(jiao)過夜(ye)(根據雜(za)交(jiao)情況(kuang)可以調(diao)節)。

9．雜交后洗(xi)滌(di)：揭掉蓋玻(bo)片，37℃左右水(shui)溫(wen)的2×SSC洗(xi)滌(di)5分(fen)鐘(zhong)×2次(ci)；37℃0.5×SSC洗(xi)滌(di)15分(fen)鐘(zhong)×1次(ci); 37℃0.2×SSC洗(xi)滌(di)15分(fen)鐘(zhong)×1次(ci)(如果有非特異性染色，重復0.2×SSC洗(xi)滌(di)15分(fen)鐘(zhong)×1-2次(ci))。

10.滴加封(feng)閉液：37℃30分(fen)鐘。甩去多余液體，不洗

11.滴加化鼠抗*：37℃ 60分(fen)鐘或室(shi)溫120分(fen)鐘。原位雜交用(yong)PBS洗(xi)(xi)5分(fen)鐘×4次(ci)。勿(wu)用(yong)其(qi)它緩(huan)沖液和蒸餾(liu)水(shui)洗(xi)(xi)滌。

12.滴加SABC：37℃20分鐘(zhong)或室(shi)溫(wen)30分鐘(zhong)。原位雜(za)交用(yong)PBS洗(xi)5分鐘(zhong)×3次(ci)。勿(wu)用(yong)其它緩(huan)沖液和蒸(zheng)餾水洗(xi)滌。

13.滴加化過氧化物(wu)酶：37℃20分(fen)鐘或室(shi)溫30分(fen)鐘。原位雜(za)交用PBS洗5分(fen)鐘×4次。

14.DAB顯色(se)(se)：使用DAB顯色(se)(se)試(shi)劑盒—1ml蒸餾水(shui)加顯色(se)(se)劑Ａ，Ｂ，C各一(yi)滴，混勻，加至(zhi)標本(ben)上。一(yi)般(ban)顯色(se)(se)20-30分鐘(zhong)。若(ruo)無背景出現(xian)則可(ke)繼續顯色(se)(se)。也(ye)可(ke)自配DAB顯色(se)(se)劑后顯色(se)(se)。充分水(shui)洗。

15.必要時(shi)蘇木素(su)復染，充(chong)分水洗。

16.酒(jiu)精脫水，二(er)甲苯透明(ming)，封(feng)片。