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產(chan)品(pin)名稱(cheng)：小鼠腎小球(qiu)內皮細胞(bao)
英文(wen)簡(jian)稱：MGECs細胞

貨號：LZ-X969980
規格：T25
生長特性：貼壁(bi)

凍存(cun)培養基：
凍(dong)存(cun)細(xi)胞(bao)時必須使用推(tui)薦的凍(dong)存(cun)培養基(ji)。凍(dong)存(cun)培養基(ji)中應(ying)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養基。
1）細胞凍存(cun)培(pei)養(yang)基是一種用(yong)于哺乳動物細胞的(de)即用(yong)型*凍存(cun)培(pei)養(yang)基，其(qi)所(suo)含胎牛血(xue)清(qing)和牛血(xue)清(qing)比例經過優化，可(ke)改善細胞活力以及解凍后的(de)細胞復蘇效(xiao)果。 
2）凍存(cun)(cun)培養基(ji)是一種化學成分確定的(de)、無(wu)蛋白、無(wu)菌凍存(cun)(cun)培養基(ji)，含10% DMSO，適用(yong)于多(duo)種干細胞(bao)和原代細胞(bao) (黑色(se)素細胞(bao)除外) 的(de)凍存(cun)(cun)。
培養(yang)細胞凍(dong)存方案：
以(yi)下實驗方案介紹了培養細胞凍存(cun)的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對(dui)具體細胞的產品說明(ming)書。 
1.配(pei)制凍存培養(yang)(yang)基(ji)，于2°C至(zhi)8°C下儲存，直至(zhi)使用。請注意使用何種凍存培養(yang)(yang)基(ji)取決(jue)于所用細胞系(xi)。
2.凍(dong)存貼壁細胞時(shi)，利用傳代(dai)時(shi)所用方(fang)法輕柔地使細胞從(cong)組(zu)織(zhi)培養(yang)容器上脫(tuo)離下來。用該細胞所需(xu)*培養(yang)基重新懸浮細胞。
3.采用、細(xi)胞(bao)計數儀按照(zhao)臺(tai)盼藍拒染法或者使用自(zi)動(dong)細(xi)胞(bao)計數儀測定總細(xi)胞(bao)數和活(huo)細(xi)胞(bao)百分比。根據所需活(huo)細(xi)胞(bao)密度，計算凍存培(pei)養(yang)基(ji)需要量。
4.以大約(yue)100-200×g的離心(xin)力將(jiang)細(xi)胞懸液(ye)離心(xin)5至10分鐘。在(zai)無菌條件下小心(xin)倒(dao)掉上清液(ye)，不要攪動細(xi)胞沉淀(dian)。
注：離(li)心速度和(he)時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍(dong)存培養(yang)基重新懸浮細(xi)(xi)胞沉淀，將(jiang)其調整至該(gai)細(xi)(xi)胞適合的活(huo)細(xi)(xi)胞密度。
6.將細胞懸(xuan)液(ye)分裝(zhuang)到(dao)若干凍存管(guan)中。分裝(zhuang)時，應不時輕輕混合(he)細胞，使其保持均勻的細胞懸(xuan)液(ye)狀態。
7.使用可控(kong)制降溫速度的(de)冷(leng)凍(dong)(dong)(dong)裝置(zhi)冷(leng)凍(dong)(dong)(dong)細胞(bao)，使溫度每分鐘大(da)約降低  1°C。或者，將裝有細胞(bao)的(de)凍(dong)(dong)(dong)存(cun)管放入凍(dong)(dong)(dong)存(cun)盒中(zhong)，然后將凍(dong)(dong)(dong)存(cun)盒置(zhi)于-80°C條件下過夜。

實(shi)驗材料(liao)： 
1. 50ml 配(pei)制好的RPMI1640培養液1瓶；8ml小牛(niu)血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰(yi)蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒(shao)杯2個；
3、50ml離心筒2個 
4、滅菌培(pei)養皿1個，細胞培(pei)養瓶(ping)1個 
5、1ml ，200μl移(yi)液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6、細胞計數板1塊； 
7、滅(mie)好菌的(de)鑷子1把(ba)，剪刀1把(ba)； 
8、酒(jiu)精(jing)燈1臺(tai)；

實驗(yan)報(bao)告：
一、分(fen)離(li)與培(pei)養：
   1、無菌(jun)條件(jian)下(xia)，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用(yong)PBS將(jiang)此組織塊清洗2次，最后將(jiang)組織剪成1mm3左右大小(xiao)；
   2、往(wang)組織塊(kuai)中(zhong)加(jia)入(ru)4 mL酶(mei)消化(hua)(hua)液（0.1% 胰酶(mei)和0.1% I型膠原酶(mei)），混懸(xuan)10s，置37℃條(tiao)件(jian)下消化(hua)(hua)10min，之后用滴(di)管吹打制成單細胞懸(xuan)液，自然沉淀并收(shou)集上清，用含10% FBS培養基終(zhong)止消化(hua)(hua)后4℃放置；
   3、剩下(xia)的組織再加入3～4mL酶(mei)消(xiao)化(hua)液，混懸10s，置(zhi)37℃消(xiao)化(hua)10 min后，按(an)上(shang)述方法收集上(shang)清并終止消(xiao)化(hua)后4℃放(fang)置(zhi)，重復(fu)此步驟2-3次，直至組織*被消(xiao)化(hua)；
   4、用(yong)200目不銹鋼篩(shai)網過濾細胞消化液，1200r/min 離心(xin)10min，棄去上清(qing)，沉淀細胞用(yong)含有10％ FBS DMEM/F12培(pei)養(yang)(yang)基混(hun)懸，接種(zhong)于(yu)25cm2培(pei)養(yang)(yang)瓶(ping)，放(fang)置(zhi)于(yu)37℃ ，5％CO2 培(pei)養(yang)(yang)箱中(zhong)培(pei)養(yang)(yang)；
   5、差速貼(tie)壁1h后，吸(xi)出(chu)培(pei)養(yang)基，按(an)實驗需要接種于6孔板中繼續培(pei)養(yang)；
二(er)、免疫熒光鑒定：
   1、待心(xin)房肌(ji)細胞(bao)生(sheng)長至80%融合時，棄去培(pei)養基，用(yong)溫育的PBS沖洗(xi)細胞(bao)2次(ci)，每次(ci)10min，然后用(yong)4%多聚(ju)甲醛在室溫條件(jian)下固定細胞(bao)15min；
   2、PBS沖(chong)洗細(xi)胞(bao)2次，每次10min，然后在(zai)4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜(mo)15min；
   3、PBS沖洗細胞2次(ci)，每次(ci)10min，然后在室溫條件下(xia)，用4% BSA封閉細胞30min；
   4、按(an)1: 100的比(bi)例稀釋α-actin一抗，然后將(jiang)其放(fang)在4℃冰箱中(zhong)孵育(yu)細(xi)胞(bao)過夜；
   5、PBS沖(chong)洗(xi)細(xi)胞3次，每次10min，按1：150的(de)比例(li)稀釋抗(kang)α-actin的(de)二抗(kang)， 37℃條件下(xia)放置1h；
   6、用PBS沖洗(xi)3次，每次10min，最后在(zai)倒置熒光顯微
鏡下(xia)觀察圖像并(bing)拍照。

Sorensen磷酸緩(huan)沖液(0.1mol/L,pH5.3-8.04)(-)-Epigallocatechin Gallate；表沒(mei)食(shi)子兒茶素沒(mei)食(shi)子酸酯縮酶（ADOLASE）活性(xing)比色法定(ding)量檢測試(shi)劑盒

Sorensen磷酸(suan)緩沖液(1×,pH6.2)(-)-Epigallocatechin Gallate；表(biao)沒(mei)食子兒茶素沒(mei)食子酸(suan)酯染色質免疫(yi)沉(chen)淀(dian)分析（CHIP）試劑盒

Sorensen磷(lin)酸緩沖液(10×,pH6.2)Epimedin A；朝藿(huo)定(ding)A染色質免疫沉(chen)淀分析（CHIP）*試劑盒（包括抗體）

TBS緩(huan)沖液(0.02mol/L,pH8.2)Epimedin A；朝藿(huo)定(ding)A人類(lei)巨病蛋白酶（HCMV PROTEASE）活性熒光(guang)淬滅法定(ding)量(liang)檢測試劑盒

TBS緩沖液(ye)(0.05mol/L,pH7.4)Epimedin B；朝(chao)藿定(ding)B人體(ti)鼻病（rhinovirus）定(ding)量PCR擴增檢測試劑盒

Tris-Maleate緩沖(chong)液(0.1mol/L,pH5.08-8.45)Epimedin B；朝(chao)藿(huo)定(ding)B人體鼻病（rhinovirus）定(ding)性檢(jian)測試(shi)劑盒

Tris-Maleate緩沖液(1mol/L，pH5.0-8.5)Epmedin C；朝藿定(ding)C人體腺病(bing)（adenovirus）定(ding)量(liang)PCR擴增檢測試(shi)劑盒

Tris-Maleate緩沖(chong)液(1mol/L，pH5.0-8.5)Epmedin C；朝藿定C人體腺病(bing)（adenovirus）定性檢(jian)測試劑盒

阿拉伯膠水溶液(10%)Ezetimibe；依澤替米貝/依折麥布溶酶體形態染色試劑盒

阿拉伯(bo)膠水溶液(25%)Ezetimibe；依澤替米貝/依折麥布溶酶體型酸性磷酸酶總活性比色法定量檢測試劑盒

緩(huan)沖液(5×,pH7.4)Ezetimibe；依澤替米貝/依折麥布溶酶體脂酶（酸性脂酶）活性比色法定量檢測試劑盒

鈉緩(huan)沖液(pH7.4)Erythromycin；紅霉素溶酶體脂酶（酸性脂酶）活性染色試劑盒

鈉溶(rong)液(0.1mol/L)Erythromycin；紅霉素肉堿棕櫚酰轉移酶（CARNITINE PALMITOYL－TRANSFERASE）總活性比色法定量檢測試劑盒

鈉溶液(0.1mol/L)Erythromycin；紅霉素肉堿棕櫚酰轉移酶I（CARNITINE PALMITOYL－TRANSFERASE I）活性比色法定量檢測試劑盒

鈉緩(huan)沖液(0.1mol/L,pH8.6)Estradiol；β-雌二肉堿棕櫚酰轉移酶II（CARNITINE PALMITOYL－TRANSFERASE II）活性比色法定量檢測試劑盒
MGECs細胞XII B組(zu)磷(lin)脂酶(mei)A2(PLA2G12B)酶(mei)聯免疫(yi)吸附測定試劑盒(he)Human A1BG(Alpha-1B-glycoprotein) ELISA Kit人(ren)瘤病16型E7抗體(ti)

髓(sui)系觸發受體-1(TREM-1)酶聯免疫吸附測定試劑盒Human SATB1 ELISA Kit人類狀瘤病58 E6蛋白抗體

黑素轉鐵(tie)蛋白(MFI2)酶聯免疫吸附測定試劑盒Human SATB2(Special AT-rich sequence-binding protein 2) ELISA Kit人類狀瘤病16抗體

抗(kang)酸(suan)性磷酸(suan)酶(ACP5)酶聯免疫吸附測定試劑盒Human SBDS ELISA Kit人類狀瘤病18 E7抗體

甲狀腺原氨酸(suan)(Thyronine)酶聯免疫吸附測定試劑盒Human SA1 ELISA Kit人類狀瘤病31 E7抗體

脂(zhi)聯素(ADP/Acrp30)酶聯免疫吸附測定試劑盒Human SCAP ELISA Kit轉錄因子HES2抗體

集(ji)聚蛋白(AGRN)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Human SAPS3 ELISA Kit轉錄因子HES3抗體
注意事項：
     盡管(guan)經測(ce)試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其(qi)檢測(ce)效(xiao)果無(wu)顯(xian)著影(ying)響，但(dan)為取得良好的(de)使用效(xiao)果，3-6個月(yue)內推薦4℃保存，并適(shi)當注意避(bi)免反復凍融。
     如(ru)果有(you)細(xi)菌或真菌污染，會嚴重影響檢測效果。
     染(ran)色(se)后宜盡快檢測(ce)，時間過長可能會導(dao)致凋(diao)亡或壞死(si)細胞的數(shu)量增加(jia)。
     如果細胞收集過程(cheng)中使用(yong)了(le)胰酶(mei)，需注意(yi)設法(fa)去除(chu)殘(can)留(liu)的胰酶(mei)。殘(can)留(liu)的胰酶(mei)會消化并降解Annexin V-FITC，導致(zhi)染色失(shi)敗。
     熒(ying)(ying)光(guang)(guang)物質均易(yi)發生淬滅，在進行熒(ying)(ying)光(guang)(guang)觀察時，盡量縮短觀察時間，同時在操(cao)作(zuo)和存放過程中也盡量注意避光(guang)(guang)保存。
     用于流式細(xi)胞(bao)儀檢(jian)測時，如(ru)果發現(xian)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xian)了過多的(de)(de)PI假陽性細(xi)胞(bao)，并(bing)且通(tong)過調整相關設置和參數也無法(fa)改善，可(ke)以用PBS將(jiang)Annexin V-FITC稀釋3-10倍后(hou)再進行檢(jian)測，這樣通(tong)常可(ke)以有效減少假陽性的(de)(de)壞死細(xi)胞(bao)。
     需(xu)自(zi)備(bei)PBS。
     本產(chan)品于專業人員的科學研究用，不(bu)得用于臨床診(zhen)斷(duan)或治療，不(bu)得用于食品或藥(yao)品，不(bu)得存放于普通(tong)住宅內(nei)。
     為(wei)了您的安(an)全(quan)和健(jian)康，請穿實驗服并戴一次(ci)性(xing)手(shou)套操作。