產品名稱：小鼠主動脈(mo)內(nei)皮細(xi)胞
英文簡稱：MAEC細胞

貨號：LZ-X969979
規格(ge)：T25
生長特性：貼壁

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凍存(cun)培養基(ji)：
凍(dong)存細胞時必須使用(yong)推薦的(de)凍(dong)存培(pei)養基(ji)。凍(dong)存培(pei)養基(ji)中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養基。
1）細(xi)胞(bao)凍存(cun)培養基是(shi)一種用于哺乳動物(wu)細(xi)胞(bao)的(de)即用型(xing)*凍存(cun)培養基，其所含胎牛(niu)血清和牛(niu)血清比(bi)例經(jing)過優化，可改(gai)善細(xi)胞(bao)活力以(yi)及解凍后的(de)細(xi)胞(bao)復蘇(su)效(xiao)果(guo)。 
2）凍存培養基是一種化學成分確定的(de)(de)、無蛋白、無菌凍存培養基，含10% DMSO，適用于多(duo)種干細(xi)胞(bao)和原代(dai)細(xi)胞(bao) (黑色素細(xi)胞(bao)除(chu)外(wai)) 的(de)(de)凍存。
培(pei)養細胞凍(dong)存方案：
以下(xia)實驗方案介紹了培養細(xi)(xi)胞凍存的(de)一般流程。詳細(xi)(xi)的(de)實驗方案，必須(xu)參閱(yue)針對具體細(xi)(xi)胞的(de)產品說明書。 
1.配制凍(dong)存(cun)培養(yang)基，于(yu)2°C至8°C下儲存(cun)，直至使(shi)用(yong)(yong)。請注意使(shi)用(yong)(yong)何(he)種凍(dong)存(cun)培養(yang)基取決(jue)于(yu)所用(yong)(yong)細胞系。
2.凍存貼壁(bi)細(xi)胞時(shi)(shi)，利用傳代時(shi)(shi)所(suo)用方法輕柔地使細(xi)胞從組織培養(yang)容器上(shang)脫離(li)下來。用該(gai)細(xi)胞所(suo)需*培養(yang)基重新(xin)懸浮(fu)細(xi)胞。
3.采用(yong)、細胞(bao)計數(shu)儀(yi)按(an)照臺盼藍拒染(ran)法或者(zhe)使用(yong)自動細胞(bao)計數(shu)儀(yi)測定總細胞(bao)數(shu)和活細胞(bao)百分比。根(gen)據所需(xu)活細胞(bao)密度，計算凍存(cun)培養基需(xu)要量。
4.以大約100-200×g的離(li)心力將細胞(bao)(bao)懸液離(li)心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉(diao)上(shang)清液，不要攪動細胞(bao)(bao)沉淀。
注：離心(xin)速(su)度(du)和時間取決于細胞種類。
5.用預冷(leng)的凍(dong)存(cun)培養(yang)基重新(xin)懸(xuan)浮細(xi)胞沉(chen)淀，將其調整(zheng)至(zhi)該細(xi)胞適(shi)合的活細(xi)胞密(mi)度。
6.將細胞懸(xuan)液(ye)分裝(zhuang)到若干凍存管(guan)中。分裝(zhuang)時，應(ying)不時輕輕混合(he)細胞，使其保持均勻的細胞懸(xuan)液(ye)狀態。
7.使用可控制降溫(wen)速度的冷凍(dong)裝(zhuang)(zhuang)置冷凍(dong)細(xi)胞(bao)(bao)，使溫(wen)度每分鐘大約降低(di)  1°C。或(huo)者，將裝(zhuang)(zhuang)有細(xi)胞(bao)(bao)的凍(dong)存管放(fang)入凍(dong)存盒中，然后將凍(dong)存盒置于-80°C條件下過夜(ye)。

實驗材料(liao)： 
1. 50ml 配制好(hao)的RPMI1640培養液1瓶(ping)(ping)(ping)；8ml小牛血清（FCS) 1瓶(ping)(ping)(ping)；100ml 0.25%胰蛋(dan)白(bai)酶 1瓶(ping)(ping)(ping)；PBS(-)1 瓶(ping)(ping)(ping) 
2. 100ml滅(mie)菌燒杯(bei)2個；
3、50ml離心(xin)筒2個 
4、滅菌培養皿(min)1個(ge)，細胞培養瓶(ping)1個(ge) 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(ge)(ge)；無菌玻(bo)璃攪拌棒1個(ge)(ge) 
6、細胞計數板(ban)1塊； 
7、滅(mie)好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺；

實驗報(bao)告：
一、分離與培養：
   1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大(da)鼠心房組(zu)織(zhi)，然后用PBS將此組(zu)織(zhi)塊清(qing)洗(xi)2次，最后將組(zu)織(zhi)剪成1mm3左右(you)大(da)小；
   2、往組織塊中加(jia)入(ru)4 mL酶消化(hua)液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原(yuan)酶），混懸10s，置(zhi)37℃條件(jian)下消化(hua)10min，之(zhi)后用滴管吹(chui)打制成單細胞(bao)懸液，自(zi)然沉淀并收集上清，用含(han)10% FBS培養基終止消化(hua)后4℃放(fang)置(zhi)；
   3、剩下(xia)的(de)組織(zhi)再加入3～4mL酶消(xiao)(xiao)化(hua)液(ye)，混懸(xuan)10s，置37℃消(xiao)(xiao)化(hua)10 min后(hou)，按上(shang)述方法收集上(shang)清并終止消(xiao)(xiao)化(hua)后(hou)4℃放置，重復此步驟(zou)2-3次(ci)，直至(zhi)組織(zhi)*被消(xiao)(xiao)化(hua)；
   4、用(yong)200目不銹鋼篩(shai)網過濾(lv)細胞(bao)消化(hua)液，1200r/min 離心10min，棄去上(shang)清，沉淀細胞(bao)用(yong)含有10％ FBS DMEM/F12培養基(ji)混懸，接種(zhong)于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
   5、差速貼(tie)壁(bi)1h后，吸出培養(yang)基，按(an)實驗需要接(jie)種于6孔板中繼續培養(yang)；
二、免疫熒光鑒(jian)定：
   1、待(dai)心房肌細胞生(sheng)長至80%融合(he)時，棄去(qu)培養基，用溫育的PBS沖(chong)洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
   2、PBS沖洗細胞2次(ci)，每次(ci)10min，然后在4℃條件(jian)下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細胞(bao)2次，每次10min，然后在室溫(wen)條件(jian)下，用4% BSA封閉細胞(bao)30min；
   4、按1: 100的比(bi)例(li)稀釋α-actin一抗，然后將(jiang)其放在4℃冰(bing)箱中孵(fu)育細(xi)胞過夜；
   5、PBS沖洗(xi)細胞3次(ci)(ci)，每次(ci)(ci)10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條(tiao)件下(xia)放(fang)置1h；
   6、用(yong)PBS沖(chong)洗3次(ci)，每次(ci)10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍(pai)照。

注意事(shi)項：
     盡(jin)管經測(ce)試Annexin V-FITC反復凍融5次(ci)對于(yu)其檢測(ce)效果無(wu)顯(xian)著影(ying)響，但為取得良(liang)好的使(shi)用效果，3-6個月(yue)內推薦(jian)4℃保存，并適當注意避免反復凍融。
     如(ru)果有細菌或真菌污染，會嚴重影響檢測效果。
     染色后宜盡快(kuai)檢(jian)測，時間過長(chang)可能會導致(zhi)凋亡或壞死細(xi)胞(bao)的(de)數(shu)量增加。
     如果(guo)細胞收集(ji)過程中使用了胰(yi)(yi)酶，需(xu)注意設(she)法去(qu)除殘留的胰(yi)(yi)酶。殘留的胰(yi)(yi)酶會消化并降(jiang)解Annexin V-FITC，導致染色(se)失敗。
     熒光(guang)物質均易(yi)發生淬(cui)滅(mie)，在進(jin)行熒光(guang)觀(guan)察時，盡(jin)量(liang)縮短觀(guan)察時間，同時在操作和存放(fang)過程中也盡(jin)量(liang)注意避(bi)光(guang)保存。
     用(yong)于流式細胞儀檢測(ce)時(shi)，如果發現(xian)Annexin V-FITC單獨染色時(shi)出(chu)現(xian)了過多的PI假陽性(xing)細胞，并且通過調(diao)整(zheng)相關設(she)置和參數也無法改善，可以用(yong)PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jin)行檢測(ce)，這樣通常可以有(you)效減少假陽性(xing)的壞死細胞。
     需(xu)自備PBS。
     本(ben)產(chan)品于(yu)專業人(ren)員的科(ke)學研究(jiu)用(yong)，不得用(yong)于(yu)臨床診斷或治療，不得用(yong)于(yu)食品或藥品，不得存放于(yu)普通住宅(zhai)內。
     為了您的安全和健(jian)康(kang)，請(qing)穿實驗服并戴(dai)一(yi)次(ci)性(xing)手套操作。
脫(tuo)氧膽酸鈉溶液(ye)(10%,pH7.0)Epalrestat；依帕司他培養液高密度脂蛋白膽固（HDL-Cholesterol）酶連續循環比色法定量檢測試劑盒

脫氧(yang)膽酸(suan)鈉溶(rong)液(10%)Epalrestat；依帕司他培養液瓜氨酸含量比色法定量檢測試劑盒

脫氧(yang)膽酸鈉(na)溶液(1%,pH7.0)Epibrassinolide；24-表油菜素內酯培養液抗壞血酸比色法定量檢測試劑盒

脫氧膽(dan)酸鈉溶液(1%)Epibrassinolide；24-表油菜素內酯培養液氧化應激活性氧（ROS）比色法定量檢測試劑盒（超氧陰離子）

甘油(you)-孔雀綠染色液Epibrassinolide；24-表油菜素內酯培養液氧化應激活性氧（ROS）紅色熒光測定試劑盒（超氧陰離子）

甘油(you)-亞甲藍染色液(-)-Epicatechin；表兒茶素培養液總脂蛋白膽固（Total L-Cholesterol）酶連續循環比色法定量檢測試劑盒

金(jin)-酚染色液(-)-Epicatechin；表兒茶素皮爾斯（PERLS-DAB）非血紅素鐵（三價）強化染色試劑盒

Heinz小體染色液(耐(nai)爾(er)藍(lan)法(fa))(-)-Epicatechin；表兒茶(cha)素蘋果酸脫氫(qing)酶(mei)（MDH）活性比(bi)色法(fa)定量(liang)檢測試劑盒

Heinz小體染色液(結晶紫法)(-)-Epicatechin gallate；表兒茶素(su)沒食子酸酯葡(pu)萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PD）活性酶動力比色法定量檢測試劑(ji)盒(he)

茚三酮乙溶液(0.1%)(-)-Epicatechin gallate；表兒茶素沒食子酸酯葡萄糖激酶（glucose kinase）比色法定量檢測試劑盒

Apathy糖膠(jiao)封片劑(ji)(-)-Epicatechin gallate；表兒茶素(su)沒(mei)食(shi)子(zi)酸酯茜素(su)紅（ALIZARIN RED S）鈣染色試劑(ji)盒(he)

DMDC玻(bo)片硅化劑(2%)(-)-Epicatechin gallate；表兒茶素沒食子酸酯茜素紅（ALIZARIN RED S）鈣染(ran)色試劑盒

玻片硅化試劑盒(APES法)(-)-Epigallocatechin；表沒食子兒茶素羥賴氨酸（hydroxylisine）含量比色法定量檢測試劑盒

玻片硅化試劑盒(APES法)(-)-Epigallocatechin；表沒食子兒茶素切割酶/β分泌酶（MENAPSIN 2；β－SECRETASE）活性熒光淬滅法定量檢測試劑盒

PBS-Triton去(qu)污劑(-)-Epigallocatechin Gallate；表(biao)沒食子兒茶素沒食子酸酯去(qu)甲基化處理(li)試劑盒
MAEC細胞微(wei)纖絲相關蛋白4(MFAP4)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Human SCCPDH ELISA Kit肝核因子1β/HNF-1β抗體

蛋白二硫化物(wu)異構酶A3(PDIA3)酶聯免疫吸附測定試劑盒Human SART1 ELISA KitHHLA3蛋白抗體

過氧化(hua)還原酶1(PRDX1)酶聯免疫吸附測定試劑盒Human SCEL ELISA KitHHIP樣蛋白2抗體

胎(tai)盤堿(jian)性磷(lin)酸酶(PLAP/ALPP)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Human SART3 ELISA KitA型流感病H3N2-M2蛋白抗體

趨化(hua)因子(zi)CC受體8(CCR8)酶聯免疫吸附測定試劑盒Human SAT2 ELISA KitHSH2D抗體

神經特異性烯化酶(mei)(NSE)酶聯免疫吸附測定試劑盒Human SAMM50 ELISA Kit水蛭素抗體

糖原合成(cheng)酶(mei)激酶(mei)3β(GSK3β)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Human SASS6 ELISA Kit白抗原A抗體