注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊(kuai)（96孔）
2、 標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)（凍干(gan)品(pin)(pin)）： 2瓶，請臨用前(qian)15分鐘內(nei)配制。每(mei)瓶以樣(yang)品(pin)(pin)稀釋(shi)(shi)(shi)液稀釋(shi)(shi)(shi)至(zhi)0.5ml，蓋好后(hou)(hou)室溫(wen)靜置大約10分鐘，同(tong)時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度(du)為200 U/L，然后(hou)(hou)做系列倍比稀釋(shi)(shi)(shi)（注(zhu)：不要直接(jie)在板中進行倍比稀釋(shi)(shi)(shi)），分別配制成(cheng)200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣(yang)品(pin)(pin)稀釋(shi)(shi)(shi)液直接(jie)作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)：取(qu)0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上(shang)述標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)加入含(han)有0.3ml樣(yang)品(pin)(pin)稀釋(shi)(shi)(shi)液的Eppendorf管(guan)中，混勻即可，其余濃度(du)以此(ci)類(lei)推。
3、 樣(yang)品稀釋(shi)液(ye)：1×20ml。
4、 檢測(ce)稀釋液(ye)A：1×10ml。
5、 檢測稀釋(shi)液(ye)B：1×10ml。
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實驗過程：
一、試劑準(zhun)備
1. DNA模板
2．對應目(mu)的(de)(de)(de)基(ji)因(yin)的(de)(de)(de)特異(yi)引(yin)物（在(zai)PCR反應中，新合成(cheng)的(de)(de)(de)DNA是要接在(zai)一(yi)小段序列(lie)上才(cai)能(neng)繼續(xu)按照(zhao)模板DNA復制，而不(bu)能(neng)從無(wu)到有，憑空合成(cheng)。這(zhe)一(yi)小段序列(lie)就是你所要有設(she)(she)計(ji)的(de)(de)(de)引(yin)物。可(ke)以(yi)是DNA也(ye)可(ke)以(yi)是RNA，一(yi)般20多bp，需要根據(ju)你的(de)(de)(de)模板鏈設(she)(she)計(ji)。因(yin)此，擴增不(bu)同的(de)(de)(de)基(ji)因(yin)需要設(she)(she)計(ji)不(bu)同的(de)(de)(de)引(yin)物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二(er)、操(cao)作步驟
1．在冰浴(yu)中(zhong)，按(an)以下(xia)次(ci)序將各(ge)成(cheng)分加入一無菌(jun)0.5ml離心管中(zhong)。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模(mo)板(ban)（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合(he)液(ye)稍加離心，立即置(zhi)PCR儀上，執行擴(kuo)增。一般：在93℃預變(bian)性3-5min，進入循(xun)(xun)環(huan)擴(kuo)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循(xun)(xun)環(huan)30-35次，zui后(hou)在72℃ 保溫7min。
3．結(jie)束反應，PCR產物放(fang)置于(yu)4℃待電(dian)泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳(yong)(yong)檢測(ce)：如(ru)在(zai)反(fan)應管中加(jia)有石(shi)蠟油，需用100μlLuFang進行(xing)抽提(ti)反(fan)應混合液(ye)，以除去石(shi)蠟油；否則，直接取5-10μl電泳(yong)(yong)檢測(ce)。
三(san)、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
２．純(chun)化模板所選用的方法對污染的風(feng)險有極(ji)大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純(chun)化的方法越(yue)簡單越(yue)好。
３．所有試(shi)劑都應(ying)(ying)該沒(mei)有核酸和核酸酶的(de)污染。操作(zuo)過程中均應(ying)(ying)戴手套(tao)。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(ying)該(gai)以大(da)體積配制(zhi)，試驗(yan)一(yi)(yi)下是否滿意，然后(hou)分裝成僅夠一(yi)(yi)次使用的量儲(chu)存，從(cong)而確保實驗(yan)與實驗(yan)之間的連續性。
６．試(shi)劑或樣品準備過程(cheng)中都要(yao)使用一次性(xing)滅菌(jun)(jun)的(de)塑(su)料瓶和管(guan)子，玻璃(li)器皿(min)應洗(xi)滌干凈并高(gao)壓滅菌(jun)(jun)。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。
西索米星（標準品）2-甲氧基煙酸

大觀霉素（標準品）對溴

5-甲(jia)基(ji)四(si)氫(qing)葉酸3,5-二硝基(ji)-甲(jia)酸

吉它霉素（標準品）8-溴喹啉

交沙霉素（標準品）2--5-甲

醋酸麥迪霉素（標準品）氨基-基吡唑

依替米(mi)星（標(biao)準品）酸叔丁酯

巴龍霉素（標準品）原甲(jia)酸三(san)酯

拉寧（標準(zhun)品(pin)）三氟甲基肉桂酸

制霉菌素（標準品）2-羥基-溴甲酸

頭孢(bao)噻吩(fen)（標準品）甘氨酰鹽(yan)酸鹽(yan)

肌苷5'-單酸D-鳥氨酸鹽酸鹽

苦玄參苷X（標準品）芐脒鹽酸鹽

豆甾葡萄糖苷(標準品)6-吲哚甲酸

新霉（標準品）6-溴吲哚-2-羧酸

醌式利福平（標準品）5-溴吲哚-2-羧酸酯

甲酰利福霉素SV（標準品）6-甲氧基吲哚-2-羧酸

7－氨基去酰(xian)氧(yang)基頭孢烷酸(suan)（7-ADCA）（標準品(pin)）(R)-哌啶(ding)甲酸(suan)酯(zhi)-L-鹽(yan)

β淀粉(fen)樣肽1-42(C端(duan))/β-Amyloid 1-42 (CT)Fibulin 1/FITC  熒光素標記(ji)抗“衰老關鍵蛋白”IgG100 ul

β淀粉樣(yang)肽1-16/Aβ1-16Phospho-FHIT (Tyr114) /FITC  熒光素標記(ji)抗(kang)酸(suan)化脆(cui)性(xing)組(zu)氨酸(suan)三聯(lian)體(ti)IgG500 ul

β淀粉樣肽1-28/β-Amyloid 1-28Fibulin-5/FITC  熒(ying)光素標記抗(kang)“衰(shuai)老(lao)關鍵蛋白”IgG100 ul

激活素受體2AFLG/FITC  熒光素標記絲聚蛋白/中間絲蛋白IgG20 ul

水通道蛋白5FLIP S/L /FITC  熒光素標記凋亡調節基因之一IgG100 ul

β淀(dian)粉(fen)樣肽（1-40）FLIPS/FITC  熒(ying)光素(su)標記(ji)凋亡調(diao)節(jie)基因之一（短型）IgG100 ul

β淀粉(fen)樣肽(tai)（1-42）FN /FITC  熒光(guang)素(su)標記纖維連結蛋白(bai)IgG100 ul

載脂蛋白A1FN/RBITC  紅色熒光素標記纖維連接蛋白IgG100 ul

β-抑制(zhi)蛋白(bai)1FOS B/FITC  熒(ying)光素標記FosBIgG100 ul
轉基因植物PAT基因核酸試劑盒規格人活化素A(ACV-A)ELISA試劑盒英文名稱：Human Activin A，ACV-A ELISA Kit*

人肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA試劑盒英文名稱：Human Troponin Ⅰ，Tn-Ⅰ ELISA Kit*

人肌鈣蛋白T(Tn-T)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Troponin T，Tn-T ELISA Kit進口/原裝

人肌紅蛋白(MYO/MB)ELISA試劑盒英文名稱：Human Myoglobin，MYO/MB ELISA Kit進口/分裝

人肌腱蛋白R(TN-R)ELISA試劑盒英文名稱：Human tenascin-R,TN-R ELISA Kit*

人肌球蛋白(MYS)ELISA試劑盒英文名稱：Human Myosin，MYS ELISA Kit進口/原裝小鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠肺炎病毒（PVM）ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠肺表面活性物質相關蛋白A(SP-A)ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠泛素蛋白(Ub)ELISA試劑盒      組裝/原裝         
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴(kuo)增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。