操作步驟：

  RIPA 裂解液 ( 強 )00mL哪里有賣(mai)切取含有目的DNA 片段(duan)的瓊脂糖凝(ning)膠(jiao)條帶。

   ● 盡量切除不(bu)含有目(mu)的DNA 部(bu)分的凝(ning)膠(jiao)，減少凝(ning)膠(jiao)體積，提高DNA 回收率(lv)。

   ● 切膠時，請(qing)使用長(chang)波(bo)長(chang)UV  （360 nm ）光盒。且不(bu)要(yao)將DNA 長(chang)時間暴(bao)露在紫外燈下，以(yi)防(fang)DNA 損傷。

2  稱取凝膠的重量(liang)近似(si)地確定(ding)其體積。

   ● 凝膠重(zhong)量(liang)(liang)的稱(cheng)(cheng)量(liang)(liang)方(fang)法：取.5 ml 離心(xin)管(guan)電(dian)子天平稱(cheng)(cheng)初質(zhi)量(liang)(liang)，切(qie)膠裝在離心(xin)管(guan)后稱(cheng)(cheng)終質(zhi)量(liang)(liang)，兩(liang)者差(cha)即(ji)為膠的質(zhi)量(liang)(liang)。不同離心(xin)管(guan)的重(zhong)量(liang)(liang)可能(neng)有(you)差(cha)異，因(yin)此，每個離心(xin)管(guan)的重(zhong)量(liang)(liang)需(xu)單獨稱(cheng)(cheng)量(liang)(liang)。

3  按(an)照每00 mg 瓊脂糖凝(ning)膠對應00 µl 溶(rong)液(ye)BD 的比(bi)例(li)，向離(li)心(xin)管中加(jia)入溶(rong)液(ye)BD。

4  50 ℃水(shui)浴7-0min，直(zhi)至凝膠*溶化。期間需(xu)要振蕩(dang)混(hun)合3 次。

   ● 瓊脂糖必須*融化，以免堵(du)塞柱子，嚴重影(ying)響DNA 段的回收效率。

   ● 如(ru)果總體積大于500 µl，可適(shi)當增加溶膠時間。

   ● 若(ruo)此時溶液變紅，可(ke)加(jia)0 µl 3M NaAC ; （pH 5.2）。

5  將步驟4 所獲溶液置于(yu)DNA 純化柱(zhu)中，靜置2min 。

   ● 膠(jiao)塊(kuai)*溶解后將膠(jiao)溶液溫度降至室溫再上柱，因為純化柱在較高溫度時結合(he)DNA  的能力(li)較弱(ruo)。

6  2,000 rpm 離心min。若溶液量大于DNA 純化柱的(de)容積(ji)，可分兩次離心，棄濾(lv)液。

   ● 此時DNA 被吸附(fu)于DNA 純化柱中的硅膠膜上。

7  加入500 µl 溶液BD。2,000 rpm,  離心min，棄濾液

8  加入500 µl 溶液PE。2,000 rpm,  離心min，棄濾液。

   ● 溶液(ye)PE 初(chu)次使用(yong)前用(yong)無水乙醇按: 4 稀(xi)釋，即含80% 乙醇。

   ● 此步驟的作(zuo)用是將(jiang)硅膠(jiao)膜上吸(xi)附的蛋白、鹽等雜質洗脫，以獲得高質量DNA 段(duan)。

9  加入500 µl 溶液PE。2,000 rpm,  離心min，棄(qi)濾液。

0 2,000 rpm 離心  3min ，以*去除純化柱中的液體。

   ● 此步(bu)驟的(de)作用是去(qu)除殘留乙醇，避免殘留乙醇影響后續酶促反應。同時也利于DNA 段的(de)充(chong)分溶解(jie)。

  將離心(xin)柱置于新的(de)(de).5 ml 離心(xin)管中。向純(chun)化柱的(de)(de)處，懸空滴加(jia)30-00 µl 溶(rong)液Eluent  （60℃預熱），靜置2min 。2,000 rpm  離心(xin)min，管底即為目的(de)(de)DNA 段。貯存于-20℃。

   ● 溶液Eluent 可用無菌雙蒸水代替(ti)，但(dan)其(qi)pH 需為8.0-8.5，加入體(ti)積視(shi)DNA 目的段的多少、用戶對目的濃度要(yao)求(qiu)而定。

   ● 對溶液Eluent 60℃預熱，會(hui)提高提取DNA 目的(de)段的(de)產量。